Pull-down技術(shù)與Co-IP非常相似,只不過(guò)后者是用抗體交聯(lián)磁珠或agarose ,pull-down是用固相化的、已標記的餌蛋白或標簽蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),從細胞裂解液中釣出與之相互作用的蛋白(對混合液中的所有蛋白)。通過(guò)Pull-down技術(shù)可以確定已知的蛋白與釣出蛋白或已純化的相關(guān)蛋白間的相互作用關(guān)系,從體外轉錄或翻譯體系中檢測出蛋白相互作用關(guān)系。聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜對pull-down拉下來(lái)的蛋白復合物進(jìn)行進(jìn)一步鑒定,就能檢測出與靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì)。
實(shí)驗線(xiàn)路:
質(zhì)譜鑒定實(shí)驗流程(膠內酶解或溶液內酶解)
1:膠內酶解
2:溶液內酶解
使用儀器
Thermo Scientific Q Exactive (高分辨質(zhì)譜)
技術(shù)優(yōu)勢
適合中度復雜的蛋白質(zhì)樣品, 如相互作用的蛋白質(zhì)條帶和洗脫液; 高準確性, 高靈敏度。
實(shí)驗報告內容
1、相互作用蛋白質(zhì)譜鑒定結果(excel 列表);
2、完整的實(shí)驗步驟、使用儀器、試劑來(lái)源、軟件檢索參數等。
蛋白樣品送樣要求
樣品 | 樣品要求 |
SDS-PAGE條帶 | 考染,條帶清晰可見(jiàn) |
蛋白質(zhì)溶液 | 蛋白質(zhì)總量>5μg,濃度>0.1μg/μl; 說(shuō)明裂解液和洗脫液成分,濃度信息 |
實(shí)驗樣本預處理及運輸注意事項
為保證高質(zhì)量的技術(shù)服務(wù)結果,請您參照以下說(shuō)明對實(shí)驗樣本進(jìn)行處理和保存:
⊙蛋白洗脫液:定量并計算總蛋白量,真空干燥后,密封好管口,冰袋包裝寄送。
⊙蛋白質(zhì)條帶(考染):從凝膠上割取條帶時(shí),避免污染,將條帶放入EP管內,密封好管口,冰袋包裝寄送。
特別提醒:快遞寄送樣本運輸過(guò)程中,可能晃動(dòng)幅度會(huì )比較大,請做好基本運輸防護措施。
注:在寄送樣本時(shí),請填寫(xiě)好樣本登記表,隨樣本一同寄往本公司。
參考文獻:
Mohammad Abu-Odeh, et al. (2014) CharacterizingWWDomain Interactions of Tumor Suppressor WWOX Reveals Its Association with Multiprotein Networks. JBC, VOL. 289, NO. 13, pp. 8865–8880