同量異序標簽(Tandem Mass Tag, TMT)是基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)相對定量方法中非常常見(jiàn)的一種。TMT 標簽的多重相對定量方法具有很多優(yōu)勢,包括整個(gè)實(shí)驗周期更短、波動(dòng)更小,樣品通量更高,以及樣品間定量數據的缺失更少等。標記氨基的 TMT10plex 與 TMTsixplex 反應試劑的化學(xué)結構相同但是前者在質(zhì)量報告區域中可以提供更多的 13C 和 15N 同位素組合形式。對于某些組合間彼此僅相差一個(gè)中子的質(zhì)量,需要高分辨率的分析儀器實(shí)現串聯(lián)質(zhì)譜譜圖采集才能進(jìn)行區分。
蛋白質(zhì)組學(xué)標記定量分析的特點(diǎn)
技術(shù)優(yōu)勢
平行比較2-10個(gè)樣本;
蛋白通量高,覆蓋度高;
可用于各種類(lèi)型生物樣本。
應用領(lǐng)域
各種脅迫、生理、病理條件下細胞、組織樣品中高通量蛋白表達譜分析
各種物種的蛋白質(zhì)組草圖的構建
質(zhì)譜鑒定實(shí)驗流程
TMT法蛋白質(zhì)組定量檢測原理示意圖:
使用儀器
Thermo Scientific Q Exactive HF,Orbitrap Exploris 480 質(zhì)譜儀
樣品要求
檢測樣品 | 樣品 要求 |
細胞樣品 | 細胞數量 >1×107 |
組織樣品 | 動(dòng)物植物組織 >10mg |
蛋白質(zhì)溶液 | 蛋白質(zhì)總量>200μg,濃度>1μg/μl;說(shuō)明裂解液成分,濃度信息等 |
預處理及運輸注意事項:
為保證高質(zhì)量的技術(shù)服務(wù)結果,密封好管口,干冰包裝寄送。
快遞寄送樣本運輸過(guò)程中,可能晃動(dòng)幅度會(huì )比較大,請做好基本運輸防護措施。
注:在寄送樣本時(shí),請填寫(xiě)好樣本登記表,隨樣本一同寄往本公司。
服務(wù)收費:
詢(xún)價(jià)
實(shí)驗周期:
樣品數目 | 2-6個(gè) | 7-10個(gè) | 10個(gè)以上 |
實(shí)驗周期 | 3 weeks | 4 weeks | 5 weeks |
TMT法蛋白質(zhì)組定量研究案例:
Rodríguez-Nuevo, A., Torres-Sanchez, A., Duran, J.M. et al. Oocytes maintain ROS-free mitochondrial metabolism by suppressing complex I. Nature 607, 756–761 (2022). https://doi.org/10.1038/s41586-022-04979-5
Johnson, E.C.B., Dammer, E.B., Duong, D.M. et al. Large-scale proteomic analysis of Alzheimer's disease brain and cerebrospinal fluid reveals early changes in energy metabolism associated with microglia and astrocyte activation. Nat Med 26, 769–780 (2020). https://doi.org/10.1038/s41591-020-0815-6
Sipeng Li, et al. Proteomic Landscape of Exosomes Reveals the Functional Contributions of CD151 in Triple-Negative Breast Cancer. Molecular & Cellular Proteomics. 2021;20:100121. doi: 10.1016/j.mcpro.2021.100121. Epub 2021 Jul 13.